NGS (Hromozomski skrining)

Genetski i hromozomski pregled embrija prije nego što se stave u maternicu naziva se PGD. Da bi se ispitivanje obavilo, biopsija se može izvršiti u 3 različita stadija embrionalnog razvoja. Zdravi embrion može se prenijeti na majku nakon genetske analize polarnog tijela iz oocita, u period dijeljenja blastomera embriona ili kao što se praktikuje u današnjici primjenjuju se na ćelije trofektoderma uzete iz blastociste koja je dostigla peti dan.

Pogotovo u slučaju starije dobi majke (38 i više godina), trudnoća može da se ne razvija usled hromozomske anomalije ili trudnoća može završiti pobačajem. Pored toga, metode prenatalne dijagnoze mogu se koristiti za utvrđivanje je li trudnoća zdrava kod parova koji su pod visokim rizikom prenošenja genetske bolesti na svoju djecu. Nažalost, mnogi parovi više puta moraju podnijeti psihički, fizički i financijski teret prekida trudnoće dok ne dobiju zdravu djecu. U smislu proračuna troškova, imati zdravu bebu s PGD-om je povoljnije nego imati bolesno dijete u slučajevima kada se pretražuju i aneuploidija (hromozomski poremećaj) i bolesti jednog gena.

Sekvencija nove generacije (Sekvencija nove generacije, NGS)

Tehnologija mikroračuna koja se koristi za PGT, ili niz CGH, može ispitati sve hromozome u embrionu vezanim za oko 4000 genetskih markera razbacanih po čitavom genomu. Međutim, on to može otkriti indirektno upoređujući ga s dva poznata DNK koja su normalna.
U tehnici sekvenciranja nove generacije (NGS), DNK se u svakom uzorku enzimatski razgrađuje na milione dijelova nakon amplifikacije DNK.
Nakon nekoliko koraka čitaju se sekvence ovih fragmenata DNK i određuje se ukupni broj očitanja po embrionu.
NGS metoda je povoljnija jer pruža osjetljiviji i precizniji pregled od aCGH metode i može otkriti mozaizam u embrionima do čak 20%.

Embrioni koji sadrže dvije ili više ćelijskih populacija s različitom hromozomskom strukturom nazivaju se mozaični embrioni.
Poznato je da su mozaični embrioni povezani sa smanjenom stopom implantacije i trudnoće, povećanim genetskim anomalijama i štetnim ishodima trudnoće. Sposobnost aCGH tehnologije da otkrije mozaik brzinom od samo 50% smatra se nedostatkom u poredjenju s NGS tehnologijom, a parovima je moguće pružiti preciznije i realnije informacije o njihovim šansama za trudnoću uz prijavljenu stopu mozaičnosti koja je data upravo sa NGS.

Sveobuhvatno hromozomsko skeniranje (CCS)

CCS omogućava da se nađe najzdraviji embrion. Istovremeno, ne morate prenijeti veliki broj embrija kako biste povećali svoje šanse za trudnoću, a na taj način eliminirate rizik od višeplodnih trudnoća. Takođe povećava šansu za uspešnu implantaciju i sprečava nepotrebni prenos embrija. Ako se utvrdi I identifikuje embrion koji se ne može zadržati u majčinoj materici, sprečava se prenos tog embrija, sprečavaju se nepotrebni tretmani, a očekivanje buduće majke ne sme uzrokovati psihološke probleme. S druge strane, značajno se smanjuje rizik od pobačaja.

Niz-komparativna genomska hibridizacija (a-CGH)

Uporedna genomska hibridizacija (CGH), koja je alternativa FISH metodi u kojoj se ispituje ograničeni broj hromozoma, omogućila je ispitivanje svih hromozoma u embrionima. Međutim, značajan nedostatak tehnike je taj što je proces dug. Zbog toga se nakon biopsije embriji zamrzavaju vitrifikacijom i skladište. Budući da je vitrifikacija uspješna metoda smrzavanja-otapanja i uz sve više laboratorijskih iskustava, svi mogući postupci mogu se uspješno provesti, posebno na blastocistima 5. i 6. dana.

Što je FISH (fluorescencija u hibridizaciji sita)?

U prošlosti se tehnika FISH široko koristila za utvrđivanje aneuploidije (numerički hromozomski poremećaji) i translokacije (strukturni hromozomski poremećaji). Kao rezultat biopsije, fluorescentne sonde su pričvršćene na hromozome ćelija embriona, a signali dobiveni iz tih stanica mikroskopom se pregledavaju i dobijaju informacije o brojevima hromozoma.
8,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22, koji se sastoji od X i Y hromozoma i na temelju otkrivanja najčešćih hromozomskih anomalija kod spontanih pobačaja, paneli se koriste s ovom pločom koja se može javiti u embrionima i uzrokovati gubitak trudnoće. Prednost FISH metode je u tome što se ona može primijeniti izravno na ćelijsko jezgro. Nedostatak je taj što je broj hromozoma koji se mogu ispitati ovom metodom ograničen. Uz to, moguća je pogrešna dijagnoza signala hromozoma u metodi FISH što predstavlja još jedan nedostatak ove metode. Stoga se ova metoda trenutno koristi samo u parovima nosilaca translokacije, ako Sekvencija nove generacije (NGS)
ili metoda niza –komparativne genomske hibradizacije nisu prikladne.